前言
病毒性肝炎(viral hepatitis)是由多種不同肝炎病毒引起的一組以肝臟損害為主的傳染病，可分為甲、乙、丙、丁、戊、庚六種類型，各型之間無交叉免疫，可同時或先后感染，混合感染或重疊感染，使癥狀加重。甲型病毒性肝炎和戊型病毒性肝炎以糞－口傳播為主，常見發(fā)熱、黃疽，呈急性經(jīng)過，罕見遷延成慢性；乙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎，多經(jīng)輸血或血制品以及密切接觸傳播，易遷延發(fā)展成慢性甚至肝硬化，已證實乙型和丙型肝炎病毒感染與肝癌有一定關系；丁型病毒性肝炎需依賴于乙型肝炎病毒而存在并復制，常與乙型肝炎病毒呈混合感染或在乙型肝炎病毒陽性的慢性乙肝病程中重疊感染。目前建立的病毒性肝炎動物模型主要有甲型肝炎病毒模型、乙型肝炎病毒模型、丙型肝炎 病毒模型和戊型肝炎病毒模型。
乙型肝炎(hepatitis B)是我國乃至世界上嚴重的傳染病之一，尤其在發(fā)展中國家呈現(xiàn)高流行態(tài)勢。世界上每年因乙肝死亡病例約100萬例，占死因第7位。我國每年因乙肝死亡約30萬例，占傳染病死因第一位。因此，進行乙肝發(fā)病機制和抗病毒策略研究顯得非常重要。本部分我們就傳統(tǒng)誘發(fā)性乙肝動物模型、人源化小鼠乙肝動物模型和基因修飾乙肝動物模型進行介紹，以供研究者參考。
部分造模方法
使用動物：樹鼩、鴨、旱獺、小鼠
【造模機制】：
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)主要通過血液和血制品傳播，采用HBV患者血清或HBV DNA，經(jīng)靜脈注射或采用水動力高壓注射方式注射到動物體內(nèi)。
【造模方法】：
樹鼩：將乙肝病毒表面抗原(HBsAg)及乙肝病毒e抗原(HBeAg)均陽性的乙肝患者血清0.5ml, 經(jīng)股靜脈接種樹鼩。
鴨：將鴨乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)經(jīng)靜脈注射、肌內(nèi)注射、腹腔注射、肝內(nèi)注射和鴨胚靜脈注射方式注射到鴨體內(nèi)。
旱獺(woodchuck)：旱獺肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus, WHV)是繼人類HBV之后發(fā)現(xiàn)的另一個嗜肝DNA病毒。旱獺慢性感染W(wǎng)HV可逐步發(fā)展為重型肝炎和肝癌，與人類感染HBV發(fā)展過程極為相似。將WHV接種幼齡旱獺，可獲旱獺肝炎模型。
水動力法轉染小鼠模型：采用高壓水動力法向小鼠尾靜脈注射HBV質(zhì)粒DNA，注射后可在血清中檢測到HBV DNA。
【模型特點】：
樹鼩：感染HBV后，血液中可檢測到HBsAg、抗HBs或HBV DNA；肝組織免疫組織化學檢測可見HBsAg和（或）HBcAg;血清ALT升高；Southern blotting可檢測到肝組織中有整合形式存在的HBV DNA。樹鼩模型成本低、實驗操作方便、不受動物倫理嚴格限制。
鴨：1日齡鴨接種DHBV后感染率可接近100%，且能維持較長時間的病毒血癥，肝臟中也能檢出DHBV DNA。5日齡接種后，DHBV DNA及內(nèi)源性DNA多聚酶活性下降，14日齡接種后則不產(chǎn)生病毒血癥。感染病毒后機體可同時出現(xiàn)相應的病毒特異性體液及細胞免疫應答，產(chǎn)生鴨DHBsAg, 且能保持22周。
旱獺：感染WHV后，會出現(xiàn)WHsAg抗原血癥電鏡下可見特征性的WHV表面和核心顆粒。
水動力法轉染小鼠模型：感染HBV后，病毒滴度較高，HbsAg可在體內(nèi)維持6個月以上，HBV復制轉錄中間產(chǎn)物可在體內(nèi)持續(xù)檢測達1年。
【模型評估和應用】：
1996年，Walter等人報道樹鼩新生期接種人HBV，結局類似于人的急性自限性肝炎，成年期接種則表現(xiàn)為一過性感染。幼年和圍生期樹鼩接種HBV，可提高感染效率。新生樹鼩接種人HBV，病毒可在動物體內(nèi)長期存在并穩(wěn)定復制。2012年，在樹鼩原代肝細胞中找到了乙肝病毒和丁肝病毒的共受體－鈉離子－牛磺膽酸共轉運多肽，因而樹鼩有望成為人HBV可靠的動物模型。
鴨感染DHBV后的病毒血癥與鴨齡成相關性，DHBV的感染時機是影響感染率及預后的重要因素。1日齡鴨腹腔注射感染DHBV后，2周后陽性率為89％左右，4周后可達94％左右，并持續(xù)22周。而10日齡感染后，2周后陽性率僅16％左右，4周后38％左右，6周后可達61.1%，12周后，約1/2的DHBV陽性鴨表現(xiàn)為DHBsAg及DHBV DNA轉陰。鴨模型DHBV感染率高，易喂養(yǎng)，是一種評估臨床前期抗病毒藥物治療效果的良好模型。然而DHBV屬禽類嗜肝病毒與人HBV在結構上有較大差別，而且鴨在進化上與人類差別較大，因此不能很好地再現(xiàn)人HBV感染過程。
WHV感染新生旱獺多呈慢性感染，可用于研究HBV的慢性化機制，用于HBV疫苗及抗病毒藥物的開發(fā)和HBV生活周期、分子機制、感染及癌變機制的相關研究。但是，旱獺肝炎病毒動物模型不能直接感染HBV,WHV與HBV依舊存在一定的差異，不能完全模擬HBV的病理過程。
水動力法轉染小鼠模型：該模型可用于研究HBV生活史、慢性感染機制，并可特異性定位突變HBV-DNA，研究單個或多個基因在HBV感染進程中的作用機制；同時，由于是免疫全能小鼠，可用于研究病毒引起的免疫效應機制。
參考文獻：
1.南大航，潘寧，張建瓊．乙型肝炎動物模型研究進展. 東南大學學報（醫(yī)學版），2012, 31 (4):504-507
2.耿家寶，王玲，朱永紅．實驗感染戊型肝炎病毒動物模型的研究進展．中國預防醫(yī)學雜志，2010, 11(4):429-432
3.詹美云，劉崇柏，李成明，等．甲型肝炎病毒感染樹鼩的初步研究．中國醫(yī)學科學院學報，1981, 3 (3):148-152
4.Amado LA, Marchevsky RS,de Paula VS, el al. Experimental hepatitis A virus (HAV) infection in cynomolgus monkeys (Macaca fascicular心：evidence of active exlranepaticsite of HAV replication.Int J Exp Pathol, 2010, 91 (1):87-97
5.Dand.ri M, Burda MR, Torok E, et al. Repopulation of mouse Liver with human hepatocytes and in vivo infection wilh hepatilis B virus. Hepatology, 2001, 33 (4):981-988
6.Dorner M,Horwilz JA,Robbins JB,el al. A genetically humanized mouse model for hepatitis C virus Infection.Nature,2011,474(7350):208-211
7.Maneeral. Y, Clayson ET, Myint KS, et al. Experimental infection of the lahoratory rat with the hepatitis e virus. J Med Virol, 1996,48 (2): 121-128
8.Purcell RH, Emerson SU. Emerson. Animal Models of Hepatitis A and E. ILAR J, 2001, 42 (2): 161-177
